最早出现的是1964年开发的基于细胞的培养测定法。目前，国内外应用比较广泛的是高效液相色谱法(HPLC) 、高效液相质谱联用法(LC- MS/MS) 和免疫分析法。
色谱法已广泛应用于全血5-FU血药浓度的测定。虽然HPLC法准确性高、灵敏度高、精密度好，但样品处理复杂，回收率低，检测时间长，给大量样本快速检测带来一定困难。
高效液相质谱联用法选用质谱检测器，可利用任一质荷比或多个质荷比的离子信号进行物质的浓度检测，具有血量少，样品处理过程简单，节省溶剂用量及检测时间短等优点。同时，高效液相和质谱联用后，分辨性能高，灵敏度高，分析速度快，是一种高特异性的检测方法。但存在仪器价格昂贵，操作人员专业技术要求高 ，不易普及等缺点。
化学发光免疫分析法具有灵敏度高、宽的线性动力学范围、光信号持续时间长、分析方法简便快速结果稳定、误差小、安全性好及使用期长、样本需求量少、样本预处理简单和适用于全自动分析仪等优点，与其他方法比较优势，更好的促进 5-FU 血药浓度监测在临床中的开展。